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      細胞株凍存條件及方法

      更新時間:2012-11-02點擊次數(shù):512

      1、凍存條件:建議采用40-50%FBS+8%-10%DMSO+該細胞株無血清培養(yǎng)基

      2、凍存方法:

      ①梯度凍存:4℃——1h;-20℃——30min;-80℃——過夜

      ②使用凍存盒:直接放入-80℃冰箱中過夜(有些細胞不適應此種方法)

      3、復蘇方法:

      ①打開水浴,將培養(yǎng)基放入水浴中,待其穩(wěn)定至37℃;

      ②細胞從液氮內(nèi)取出后,應快速將細胞放于37℃水浴中,輕輕振搖,使其溶化,(盡量避免溶化前凍存管脫離水浴);

      ③將溶化后將細胞凍存懸液離心,轉(zhuǎn)速1000rpm,3min,后棄去上清,使細胞重懸在新鮮培養(yǎng)液中,進行培養(yǎng);

      ④細胞在培養(yǎng)箱中貼壁24h后,更換新鮮培養(yǎng)基,待其長滿,進行傳代。



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